由于目的不同而有不同的培養(yǎng)方法，可分為以下幾大類：

（1）與空氣隔絕或盡量少接觸空氣的培養(yǎng)法：在三角瓶瓶頸以下裝滿液體培養(yǎng)基，通過煮沸把溶解的空氣趕出后，立即冷卻進(jìn)行細(xì)菌接種。由于發(fā)酵而產(chǎn)生H2和CO2時(shí)，就可進(jìn)一步確認(rèn)是厭氧細(xì)菌。另外，把瓊脂培養(yǎng)基加入普通試管約10厘米高度進(jìn)行穿刺培養(yǎng)，或移植于液體培養(yǎng)基和固體斜面培養(yǎng)基上以后，再加一層液體石臘或礦物油，用這些方法可防止與空氣接觸。

（2）除掉空氣的方法：把微生物裝入耐壓容器中進(jìn)行真空培養(yǎng)，或充滿二氧化碳、氫氣、氮?dú)?、氬氣等。這些氣體可把事先混入的微量氧氣除掉。在氫存在時(shí)，可用置換后飛濺火花等方法來除掉殘存的氧氣

（3）去氧的方法：使用堿性鄰苯 三酚（pyrogallol） 、黃磷、金屬鉻和稀硫酸進(jìn)行化學(xué)除氧，或使用好氧細(xì)菌及發(fā)芽的種子，使通過呼吸而消耗掉氧氣。

（4）在培養(yǎng)基中加入還原劑（如0.1%的巰基乙酸鈉鹽，0.01%的硫化鈉等）。以上各種方法進(jìn)行適當(dāng)組合就能進(jìn)一步確認(rèn)厭氧細(xì)菌。為了確定厭氧性，可在堿性條件下加入葡萄糖并加熱，與配制的還原型次甲藍(lán)（美藍(lán)）溶液一起加入，保持脫色狀態(tài)即可。